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众所周知，激光对于流式细胞仪来说至关重要。而碧迪医疗流式细胞仪大多采用的是空间立体激发模式，将光强最大化地集中在流动池上，保证光在传输中的损失降到最低并为多色实验带来最佳的分辨率。
今天「体检报告」的解读主题就是与激光设置有关的两个参数-激光延迟和面积因子。 |
5 分钟学习质控报告——激光延迟和面积因子
01 Laser Delay 激光延迟
对于多激光的仪器，激光束在空间上相对独立分离，因此微粒一次通过被不同激光照射的时间是不同的。例如，在一个三激光的系统中（下图），微粒经过流动室时，首先与红激光正交，产生信号，接着依次与蓝激光、紫激光正交，导致每个激光产生的荧光信号的时间不完全同步。如果我们将蓝激光正交产生信号的时间定为「0」，那么红激光就为负值，而紫激光为正值。
Laser delay：即激光延迟，是空间立体激发的激光在时间尺度上的校正因子。通过时间延迟值来校正，来实现一个微粒上所有荧光信号的同步化 。
激光延迟包含两个值，「Trigger on FSC」和「Trigger on Fluorescence」分别对应以 FSC 设阈值和以荧光通道设阈值时的激光延迟。
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激光延迟对实验结果有什么影响呢？ 激光延迟的设定直接影响结果的准确性。 |
曾经就有老师遇到一个情况：
问题：以前能检测到红激光的信号，经过一段时间后，运用同样的样品，同样的条件，却再也检测不到了。
原因：工程师上门发现，仪器太久没有做质控，很早以前的激光延迟对于现在来说已经不对，获取到的信号必然不对。
解决方法：运行 CS&T 质控，仪器会自动校准激光延迟，红激光重新被检测到。
由此可见激光延迟的设定十分重要，如果激光延迟有偏差，会造成信号拟合的错误，导致得到的结果不准确。运行 BD CS&T 质控，则会通过最亮微球自动确定合适的激光延迟值，保证实验数据的准确。
| 我们在做 CS&T 质控时，有时会遇到「无法设定激光延迟」这个错误，怎么办呢？ |
| 可能原因 | 建议解决方案 |
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配置微球时未充分混匀 微球太稀 微球悬浮液中存在太多碎片 |
充分混匀微球，重新配置 |
| 流动室或鞘液过滤器中存在气泡 | 排除流动室或鞘液过滤器中的气泡 |
| 不稳定的鞘液压力 | 检查管路中是否存在漏液、气泡或堵塞等情况 |
| 高的散射光噪音信号 | 进行长清洗月维护 |
02 Area Scaling Factor 面积因子
荧光染料分子被激光激发后，会被接收并产生荧光电脉冲信号。Area scaling facor（ASF）, 面积因子，代表荧光脉冲面积信号与高度信号的关系。
横轴代表时间，纵轴代表高度，也就是实时荧光强度。当一个微粒被激光照射时，它的荧光强度逐渐变强，与激光正交时，达到最强，而后逐渐变弱，因此微粒的信号是一个脉冲峰的形式。平常计算的信号值是脉冲峰的面积。面积信号与高度信号的比值就是面积因子。CS&T 时运用亮微球的群体用来计算面积因子。
面积因子用于将面积测量值和高度测量值按相同的比例放置，其设置的准确性直接影响结果的准确性。
面积因子受激光束的形状和鞘液流速的影响。因此在 BD FACSAria 系统中，如果鞘液压力频繁变化，那么面积因子就需要检查和调整。
| 我们在做 CS&T 质控时，有时会遇到「面积因子浮动」这种情况，它通常是不稳定的液流和气泡引起的，该怎么办呢？ |
| 可能原因 | 建议解决方案 |
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不稳定的液流 流动室或鞘液过滤器中存在气泡 |
排除流动室或鞘液过滤器气泡，进行长清洗月维护，联系 BD 的工程师 |
| 激光未对准 | 联系碧迪医疗工程师 |
| 最大 ASF/最小 ASF>3 | 联系碧迪医疗工程师 |
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