Dennis Karthaus: 当科研人员致力于进行 SARS-CoV-2 相关研究时，首先，病毒蛋白是必不可少的，但在获得病毒蛋白的这个过程，却不应耗费研究人员太多时间和精力。在这方面 Strep-tag^® 技术可以尽其所能，借助从纯化到检测分析的一套优化后的流程，尽可能帮助他们争分夺秒。

目前，在许多的 SARS-CoV-2 相关研究，包括像来自 nature 等杂志的，已出版的文献中，都不难发现 Strep-tag^® 技术的应用。对于 Strep-tag^® 技术能在 SARS-CoV-2 的研究有所贡献，我们感到很自豪和欣慰。

在从中大部分的研究项目中，Strep-tag^® 技术被用来进行高纯度的 SARS-CoV-2 蛋白亲和纯化。还有的一部分，像 ELISA 免疫测定，将 Strep 标签蛋白固定在 Strep-Tactin^®XT 包被板上，或者是通过荧光偶联的 Strep-Tactin^®XT 进行研究。Nature 杂志上发表的一篇来自 Gordon 等人的文章，他们表达了带 Strep-tag 标签的 SARS-CoV-2 蛋白，并且在细胞破碎后将其固定在了 IBA 的 MagStrep 「type3」 beads 磁珠上。而后对病毒蛋白和人类蛋白的相互作用或是潜在的通路进行鉴定，用以筛选出潜在的药物。

另外还有一个完全不同的领域，也来自 IBA，建立在 Strep-tag^® 技术基础之上的，通过 TACS 技术进行 T 细胞和 B 细胞的分选技术。可以帮助科研人员特异性的分选到需要的免疫细胞，但无需使用磁珠和抗体，因此细胞上不会有任何的残留。并且选后的细胞可以使用 Strep-Tactin^® 染色试剂进行进一步的分析。此技术在细胞水平的免疫应答研究中可以发挥极大作用。同时，我们还提供 SARS-CoV-2 肽用于 T 细胞的刺激实验。

Dennis Karthaus: Twin-Strep-tag^®／Strep-Tactin^®XT 技术是在标签基础上的商业化技术，可以被用于有效的用于两个领域：纯化和固定化分析。

于纯化而言，此系统的解离速率须尽可能足够高，从而有效地将蛋白质从树脂上洗脱下来。但于固定化分析，此系统的解离速率又须非常低，才能将蛋白质强有力的固定在界面上。这些需求其实互相并不很兼容，但我们的技术在未向其中加入生物素（Biotin）时，可以提供在 pM 范围内的亲和力。一旦生物素加入后，标签就可以从 Strep-Tactin^® 配体上释放下来。

Strep-tag^® 对于 Strep-Tactin^® 这种特异性的结合，和加入生物素后特异性的洗脱，可以帮助研究人员获得高纯度的蛋白。针对一些特殊的纯化需求，如在保证蛋白质结构和功能的情况下进行纯化时，Strep-tag^® 系统因其提供的生理条件下的纯化，和可以耐受多种的缓冲液的特性而广受青睐。Strep-tag^® 标签很小（8-30 aa），不影响蛋白的功能和折叠，同样也成为其特色之一。因此，在大多数情况下，是不用移除标签的。而且，此系统使用同样的缓冲液和纯化 protocol 就可以兼容多种表达宿主，如细菌，哺乳动物细胞，昆虫细胞，酵母等。

另一方面，由于纯化的有效性，保证了高强度的固定化作用，从而省去了整个过程中的生物素化的步骤。这种高结合亲和力，使得我们的客户可利用此进行相互作用的研究。如 ELISA，对蛋白质以定向固定，即可增强信号强度；或使用其他方法固定蛋白质的时，可以使用荧光偶联的 Step-Tactin^®XT 进行检测。

以上这些特色都为 SARS-CoV-2 的研究中简易的实验流程而提供基础和支持。

Dennis Karthaus: 虽然目前有多种纯化标签，但仍然还存有一些缺陷。为了满足一些纯化的需求，必须研发一种可选择的合适的系统。例如，被大家熟知并且广泛使用的 His-tag 系统，却无法用于金属蛋白的纯化，并且此系统的纯度通常也不尽人意。由于供应商，样品和表达宿主的不同，镍柱的表现也会有所差别。而且，此系统的亲和力在 nM 的级别，对于有些实验则不能满足需求。而对于其他的标签，像是 myc-tag 或 FLAG-tag 等，结合载量较低而填料价格则较高。因此对于蛋白纯化，选择的局限性是很多的。

Strep-Tactin^®XT 的上市则扭转了这一局面。高亲和力使得此基于标签的技术弥补了 His-tag 技术的缺陷，并且高纯度的纯化结果不会随着样品的变化而改变。对于来自不同宿主，如细菌，哺乳动物细胞或是昆虫细胞的样品，结合同样很牢固，不需要进行一些优化（如确定适合样品的最佳咪唑浓度）。因此，使用上是非常直截了当的。相较于 myc-tag 或 FLAG-tag，树脂的结合能力得以提高，是一种经济实惠的纯化方法。

Dennis Karthaus: 起初，Strep-tag I 可以和链霉亲和素（Streptavidin）上的生物素（biotin）结合位点而结合。而后此系统升级为 Strep-tag^® II，可以在蛋白不同的末端进行修饰，更加灵活。对链霉亲和素（Streptavidin）也加以改进后，有了 Strep-Tactin^®，对于 Strep-tag II^® 有更高的亲和力。利用此标签蛋白纯化系统，可以获得高纯度的蛋白。但由于亲和力在 µM 范围内，当纯化低浓度的样品时，仍然有局限。而后，当 Twin-strep-tag^® 研发出来后，此亲和力就被提高至了 nM 的级别。Twin-strep-tag^® 是两个串联的 Strep-tag II^® 标签，中间有 linker 加以相连。此标签可以结合 Strep-Tactin^® 的两个结合位点，在解离速率减缓的基础上，亲和力得以增加。在此之后，Strep-tag 系统就可以用于低浓度样品的纯化和 ELISA 技术之中了。为了进一步增强亲和力，使得 Strep-tag^® 系统可以用于 SPR 等实验研究中，Strep-Tactin^® 进一步改进为 Strep-Tactin^®XT，对于 Strep-tag II^® 的亲和力范围在 nM，Twin-Strep-tag^® 在 pM 范围。进行了这些改进后，Strep-tag^® 系统就成为了目前为众人所熟知的，可同时应用于纯化和检测分析的全方位的系统。

当然，在完善纯化和检测系统的同时，我们将此技术也应用到了细胞领域之中。根据细胞表面标记或抗原特异性，可以对细胞进行特异性的分离。将低亲和力 Fab 片段，或 MHC I 分子肽段通过 Twin-Strep-tag^®，即可与 Strep-Tactin^® 固定。在我们的 Streptamer 技术中，Strep-Tactin^® 多聚体提供了足够的亲和力，从而可以实现通过磁珠或荧光标记物有效检测和分离细胞。我们的 Fab-TACS 技术通过细胞表面特异性标记，或外泌体表面特异性标记，可以实现无需磁珠的免疫亲和层析分离。两种技术的主要优势在于，一旦生物素破坏了 Twin-Strep-tag^®／Strep-Tactin^® 的结合，带有 Strep 标签 Fab 片段或 MHC I 复合物就会与靶细胞完全分离。

因此，我们不仅除了蛋白的纯化与检测分析系统外，还提供完全 label-free 的细胞和外泌体分离，用于各种研究应用之中。

Dennis Karthaus: 在纯化领域，Strep-Tactin^®XT 的使用较 Strep-Tactin^® 的结合载量更大，同时其优惠的定价也使得其成为了更经济的一种选择。加大的结合载量可以使我们的客户在进行大体积纯化的同时，减少样品的损失，可以为客户节省更多的经费。当高耐受性与多种试剂结合起来时，简单的纯化步骤就可以更有效的使用多种洗杂策略。比如说，当我们在中国的一个实验室进行演示实验的时候，当时项目组人员需要得到高纯度的蛋白，但无法找到合适的标签。当使用了 Strep-Tactin^®XT high capacity 高载量树脂进行纯化，并且使用了高强度洗杂液。当我们之后再与客户交流时，客户给我们展示的 SDS-PAGE 凝胶，其纯度有了显著提高，满足了客户的需求。

将此高亲和力的技术应用于检测分析时，仅将 Strep-Tactin^®XT 偶联在 SPR 或 BLI 生物感受器的芯片，捕获 Twin-strep-tag^® 后，即可测定蛋白之间的相互作用和结合动力学，可以在低 nM 的级别测定强相互作用的动力学。在其他的检测应用中，Strep-Tactin^®XT 还较 Strep-Tactin^® 显著的提高了信号强度。

Dennis Karthaus: 我们非常有兴趣和其他技术公司以及科研机构合作，将 Strep-Tactin^®XT 和 Twin-Strep-tag^®拓展至更多的应用之中。在过去的几年中，有很多的科研人员，利用了此技术实现了很多的突破。例如，瑞典公司 Mabtech 开发了 FluoroSpot 测定法，用于分析 Corep-19 恢复期患者的 B 细胞抗体分泌，其中 Strep-Tactin^®XT 发挥了关键作用。

美国公司 IMCS 将纯化树脂装填进带滤芯的移液器吸头之中，可以利用自动化的移液设备，进行小批量的高通量纯化。他们在近期已将 Strep-Tactin^®XT 树脂预装入了移液吸头中，客户可以利用此系统，进行简便的，高通量的程序。

其他的项目，比如科研人员巧妙地利用了在细胞器表面的 Strep-tag^® 融合蛋白。通过使用 Strep-Tactin^® 进行了细胞器的纯化。

同时，我们也希望可以将 Strep-Tactin^®XT 的应用拓展至更多的研究领域之中。我们非常期待可以和其他的科研项目组，科研机构与技术公司进行合作，共同推进科研技术的发展。例如，我们与赛多利斯进行了技术流程上的结合，共同撰写了细胞清除和蛋白纯化的应用实例。

此外，我们希望在中国进一步推广 Strep-tag^®技术。我们在中国的独家代理商达科为非常专业，在拥有此优秀的合作伙伴的基础上，我非常希望能再一次去中国，与对我们技术有兴趣的研究人员一起讨论，并且测试我们的技术，为 IBA 在中国建立新的合作。