体系构建
PCR Setup
在配置定量 PCR 反映体系前应将冷冻保存部分试剂解冻后使用涡旋仪(MixMate, 涡旋、振荡二合一)涡旋混匀,并在离心机(MiniSpin)中低速离心 , 保证试剂成分均一。
 

配置反应体系时一般遵循 1-14 个样品(含对照)配置 N+1 份,15 及以上样品采用N+2 份。

资料来源:https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/lab/rt-pcr-detection-instructions.html

配置定量 PCR 体系时需要使用高精准度的移液器,以避免由于加液误差造成的结果误判。加液过程中需要采用带滤芯吸头避免移液过程的交叉污染。
Reference 2 手动移液器
 

 
·  单按键设置,防止气体回吸污染腔体
·  可整支高温高压灭菌
·  极高的移液精度,满足定量 PCR 实验高精度的要求
ep Dualfilter T.I.P.S. 双滤芯吸头
 

双滤芯吸头-有效阻隔气溶胶和生物分子,确保操作人员安全,同时防止危险病毒进入移液器,造成对下次吸取样品的交叉污染。
epT.I.P.S.® Long 加长型吸头

加长型 epT.I.P.S. 吸头和 ep Dualfilter T.I.P.S. 双滤芯吸头具有细长型设计,可避免触碰这些较深容器的管壁,减少交叉污染。
Multipette M4 分液器

 
手动连续分液器是适用于精确进行冗长连续分液的理想工具。对于普通移液器难以精准移取的黏性液体如定量 PCR 反应液,Multipette M4 也能轻松移取。 与 Combitips advanced® 一起,组成一个完整的系统。 外置活塞的密封保护,使得移取传染性、有毒液体更安全。
epMotion 5070 自动移液工作站
 

 

定量 PCR 反应体系配置也可以采用 eppendorf epMotion 5070 全自动移液工作站进行
·  自由射流移液,无需管路、无气泡,最大限度地减少了交叉污染可能性 
·  极佳的移液精确度,移液 1 µL 时误差低于 2% cv
·  移液体积: 0.2-10 µL、1–50 µL、20–300µL 和 40–1000 µL 
·  单道或 8 道 
·  高温高压灭菌且易于维护 
·  动校准警告 
·  校准符合 ISO 8655 标准

* 部分产品仅限科学研究使用